AP08857430 «Выявление нового малоинвазивного биомаркера для диагностики и прогностики диабетической ретинопатии на основе микроРНК». Научный руководитель — д.б.н., проф. Шарипов К.О.

Описание проекта

Диабетическая ретинопатия (ДР) – микрососудистое осложнение сахарного диабета (СД), являющаяся основной причиной необратимой слепоты. Из-за трудностей в диагностировании ДР (бессимптомное начало, неоднозначная ранняя диагностика, высокие квалификационные требования к врачу и др.) имеется необходимость в разработке новых надежных методов диагностики и прогностики заболевания. МикроРНК по многим причинам (возможность контроля в биожидкостях, т.е. малоинвазивным методом, высокая стабильность и др.), являются перспективными биомаркерами для многих заболеваний. В рамках проекта будет осуществлен поиск ассоциации между концентрацией циркулирующей микроРНК и ДР в казахстанской популяции для разработки биомаркеров прогноза развития ДР, диагностики на ранних этапах без клинически видимых симптомов, прогноза возможных осложнений и чувствительности к лечению.

 Цель проекта: определить диагностическую и прогностическую ценность циркулирующих микроРНК при диабетической ретинопатии.

Задачи проекта

  • Формирование коллекции образцов плазмы пациентов с сахарным диабетом с ретинопатией и без ретинопатии. В качестве объекта исследования будут использованы образцы плазмы. Планируется собрать 200 образцов плазмы: 100 от пациентов СД c ДР, 100 от пациентов СД без ДР (контрольная группа).
  • Оптимизация методики выделения микроРНК из плазмы, оптимизация обратной транкрипции и количественной ПЦР, оптимизация методики нормализации количественных данных, подбор референсных контролей. Плазма относится к «трудным» объектам, на эффективность выделения РНК могут влиять липидно-белковый состав плазмы, зависящий от индивидуальных особенностей и заболевания. Выбор оптимальной методики нормализации является одним из ключевых этапов количественного анализа данных. Согласно общепринятой практике, стабильность экспрессии подобранных по литературе эндогенных референсных контролей необходимо подтверждать на изучаемой выборке. Показатели решения задачи: Ct – не менее 35 цикла; разброс значений в трех повторах – менее 0,5 цикла; эффективность ПЦР – от 90 до 105%, при R2 в пределах 0,98-1.
  • Скрининг кандидатных микроРНК на тестовой группе. Выявление микроРНК-маркеров будет осуществлено в два этапа. На первом скрининговом этапе будут протестированы 25-30 кандидатных микроРНК (отобранных по литературным данным) на выборке из 45 образцов плазмы (30 пациентов с ДР и 15 пациентов без ДР).
  • Валидация потенциальных микроРНК-маркеров на расширенной выборке. На втором валидационном этапе микроРНК-маркеры, показавшие ассоциацию с ДР, будут проверены на выборке из 200 образцов плазмы (100 пациентов с ДР и 100 пациентов без ДР).
  • Определение диагностической ценности микроРНК маркеров. Будет дана оценка способности маркеров различать больных с осложнениями ДР от больных без ДР, в том числе без клинически видимых признаков, и по клинико-паталогическим параметрам.
  • Определение прогностической ценности микроРНК-маркеров. Будет дана оценка способности маркеров прогнозировать развитие ДР у пациентов с СД, эффективность терапии, осложнения заболевания.
Показать больше
Закрыть