АР09562010 «Активность сигналов NF-κB в миелоидных супрессорных клетках, генерированных из клеток костного мозга при физиологических и патологических условиях»

АР09562010 «Активность сигналов NF-κB в миелоидных супрессорных клетках, генерированных из клеток костного мозга при физиологических и патологических условиях»

 Общая концепция проекта

Было обнаружено, что клетки-супрессоры миелоидного происхождения (MDSC), которые раньше считались патологически активированными иммунными регуляторными клетками, способствующими прогрессированию рака, являются нормальным компонентом физиологического воспалительного ответа, играющим решающую роль в гомеостазе тканей. Аберрантная активация передачи сигналов NF-κB была обнаружена в MDSC, ассоциированных с раком. Однако мало что известно о сигнальной активности NF-κB в MDSC, генерируемых в физиологических условиях. В предлагаемом проекте будут получены ex vivo модели MDSC в физиологической и патологической среде, чтобы выявить возможные различия статуса активности белков семейства NF-κB как от канонических, так и от неканонических сигналов.

Цель проекта – оценить сигнальную активность NF-κB в MDSC, индуцированных при физиологических и патологических — двух различных биологических условиях. Тем самым полученные данные проложат путь для последующих исследований молекулярных механизмов, лежащих в основе пагубной роли MDSC при определенных заболеваниях.

Задачи проекта

Задача 1. Генерировать MDSC из клеток костного мозга мышей (ККМ) при двух различных условиях: физиологических и патологических.

Объяснение: ex vivo генерация MDSC в физиологическом и патологическом контекстах поможет изучить молекулярный механизм, который определяет роль MDSC в данном биологическом контексте. Для создания MDSC в физиологическом состоянии: во-первых, предварительно будет подготовлена среда, кондиционированная звездчатыми клетками печени (hepatic stellate cells, HpSC) путем ферментативной диссоциации печени здоровой мыши и инкубации отдельных клеток в полной среде на основе RPMI. Затем часть ККМ мыши, разделенная на градиенте плотности, будет засеяна в полную среду на основе RPMI, содержащую GM-CSF и среду, кондиционированную  HpSC. Для полученя MDSC в патологическом контексте: ККМ будут культивироваться в среде с добавлением супернатанта асцитной карциномы Эрлиха от мыши с карциномой Эрлиха. Культуры клеток, полученные при данных условиях, будут оцениваться фенотипически и функционально с использованием проточной цитометрии и анализа супрессии in vitro.

Задача 2: Изучить сигнальную активность NF-κB в MDSC, генерированных при физиологических и патологических условиях.

Объяснение: Было показано, что образование гомодимера p50-50 NF-κB необходимо незрелым миелоидным клеткам, для приобретения иммуносупрессорных свойств. Кроме того, активация других субъединиц передачи сигналов NF-κB в MDSC была обнаружена при раке. В предлагаемом проекте, используя вестерн-блоттинг и анализ ядерной транслокации на основе ELISA, мы будем изучать репрезентативные гомо- и гетеродимеры белки семейства NF-κB, которые принадлежат как к канонической, так и к  неканонической передаче сигналов NF-κB, в культурах MDSC, полученных при патологических и физиологических условиях.

 

Результаты

В этом краткосрочном проекте мы разработали модели как in vitro, так и in vivo для создания MDSC. Мы успешно разработали модель раннего фиброза печени на мышах CD1 для создания физиологической воспалительной среды in vivo, которая, в свою очередь, является жизненно важным органом для локального и системного индуцирования MDSC. Параллельно с этим мы разработали модель in vivo для создания MDSC при патологическом состоянии с использованием хорошо известной модели подкожной карциномы Эрлиха.

Что касается модели in vitro, для создания MDSC в физиологических условиях мы использовали хорошо известную модель индуцированной цитокинами MDSC. В то же время мы использовали асцит Эрлиха для создания MDSC при патологическом состоянии. Кроме того, клетки, полученные из моделей in vitro, были фенотипически охарактеризованы с помощью анализа проточной цитометрии.

 

Состав исследовательской группы

 Тлеулиева Р., к.б.н., руководитель проекта. Индекс Хирша: 5. Суммарно – 47 цитирования. ORCID: 0000-0001-8897-9986. Scopus ID: 6507202148. WoS ID: N-5634-2017.

Кали А., магистр, ответственный исполнитель. Индекс Хирша: 3. Суммарно – 31 цитирований. ORCID: 0000-0002-5129-1165. Scopus ID: 57195580717. WoS ID: AAF-9781-2020.

Абдолла Н., Ph.D, исполнитель. Индекс Хирша: 4. Суммарно – 38 цитирований. ORCID: 0000-0002-4769-7824. Scopus ID: 57194001982. WoS ID: R-2193-2016.