Промежуточные результаты за 2024 год:
— Разработаны высокочувствительные и специфичные тест-системы для диагностики вирусных заболеваний плодово-ягодных культур (виноград, яблоня, малина), основанные на технологии мультиплексной ПЦР в реальном времени с использованием TaqMan-зондов. Исследованы наиболее экономически значимые вирусы этих культур: для винограда GLRaV3, GVA, GFLV и ArMV; для яблони ASGV, ASPV, ACLSV и ApMV; для малины RpRSV, RBDV, RLMV и RLBV. Проанализированы 355 образцов яблони, 211 образцов винограда и 153 образца малины, собранных в различных регионах Казахстана. Установлено наличие вирусных инфекций в 13,5% образцов яблони, 20% образцов малины и 20% образцов винограда. Наиболее распространёнными вирусами оказались у яблони ASGV и ASPV, GVA и GLRaV3 у винограда, а также RBDV у малины. Полученные данные подтверждены методом иммуноферментного анализа (ИФА), что свидетельствует о высокой надёжности разработанных тест-систем.
— Проведен сбор образцов яблонь, груш, вишен, абрикосов, персиков в Алматинской и Туркестанской областях, из которых выделены препараты нуклеиновых кислот, методом ОТ-ПЦР выявлены изучаемые вироиды, выполнено их клонирование с последующим секвенированием. На основе полученных последовательностей были подобраны пары олигонуклеотидов для одновременной детекции вироидов AFCVd, ASSVd, PBCVd, ADFVd, HSVd и PLMVd. Методом мультиплексной ОТ-ПЦР проведена диагностика вироидов в 215 образцах, которая показала присутствие вироидов в 73 образцах.
— Проведен мониторинг диких и культурных садов Алматинской и Туркестанской областей. Собран 131 образец от культурных сортов яблони, дикой яблони Malus sieversii, груши, айвы, грецкого ореха; образцы собирались с признаками поражения бактериальным ожогом, а также бессимптомные. Принадлежность к возбудителю бактериального ожога доказана иммунохроматографическим методом и ПЦР в реальном времени у 31 образца. 24 изолята Erwinia amylovora подготовлены для длительного хранения. Молекулярно-генетическим исследованием изолятов, собранных в 2023 году, 16 образцов относятся к генотипу линии А, 10 образцов – к генотипу линии D.
— На основе вектора pCambia2000 получены агробактериальные конструкции, в которых под контролем промотора и терминатора CaMV клонированы последовательностей эффекторов фитофторы Avr3a-b и PITG_03155 в прямой и обратной последовательности, разделённые интроном (UBQ10-int1 и CAT2-int2). В таком же виде в векторе pCambia2000 получена синтетическая последовательность Avh246, состоящая и участков, комплиментарных к гену 12А эндоглюконазы P. infestans, гену Avh246 P. ramorum и гену эффекторного пептида RAM3X P. infestans. Получено 16 линий трансгенных растений картофеля: сорта Милена – 2 (‘Avr3a’), 6 (‘Avh246-synth’), 1 (‘PITG’); сорта Гала – 3 (‘Avr3a’), 3 (‘Avh246-synth’). Получено 3 линии трансгенных растений табака: 1 (‘Avr3a’), 1 (‘Avh246-synth’), 1 (‘PITG’).
— Разработан протокол технологии укоренения и адаптации микрорастений картофеля в условиях in vitro – ex vitro в экспериментальных стерильных агробоксах с регулируемой микровентиляцией. Получены адаптированные растения картофеля трансформированных линий в экспериментальных агробоксах. Собрана и запущена в эксплуатацию экспериментальная аэропонная установка. Оптимизирована технология аэропонного получения миниклубней картофеля. Проведено культивирование растений контрольных и трансформированных линии картофеля в условиях аэропонной установки.
— Оптимизированы протоколы по введению в культуру in vitro и микроклональному размножению растений 4-х сортов земляники, 4-х сортов ежевики, 3-х сортов ирги, свободных от вирусной инфекции. Получены микроклонально размноженные линии этих сортов. Разработаны протоколы эффективного укоренения и адаптации растений в условиях in vitro – ex vitro в экспериментальных агробоксах для земляники, ежевики, ирги.
Область применения – плодоводство, овощеводство, молекулярная генетика, биотехнология.
За отчетный период получено 3 патента РК, поданы 2 заявки на патент РК, разработаны 2 лабораторных регламента, опубликовано 5 статей в журналах, рекомендованных КОКНВО и 3 монографии.
Статьи:
- 1 Аубакирова К.П., Бақытжанова Ж.Н., Ерболова Л.С., Рахатқызы А., Галиакпаров Н.Н. Улучшенный метод выделения РНК для молекулярной диагностики вирусов плодово-ягодных культур // Ізденістер, нәтижелер — Исследования, результаты. – 2024. — № 3 (103). – С.108-113 https://doi.org/10.37884/3-2024/12
- 2 Надирова Л., Станбекова Г., Искаков Б., Жигайлов А. Диагностика вироида латентной мозаики персика методом ОТ-ПЦР // Ізденістер, нәтижелер — Исследования, результаты. 2024. — № 3(103). — С.114–123. https://doi.org/10.37884/3-2024/13
- 3 Искакова Г.А., Жармухамедова Г.А., Джуманова Ж.К., Найзабаева Д.А., Бердыгулова Ж.А., Солтанбеков С.С., Исмагулова Г.А., Скиба Ю.А., Мальцева Э.Р. Қазақстанның жабайы алма ормандарында бактериялық күйіктің таралуын бағалау // Вестник КазНУ им. аль-Фараби. Серия экология. – 2024. — №3 (80). – С.68-76. https://doi.org/10.26577/EJE.2024.v80.i3-07
- 4 Низкородова А., Крылдаков Р., Каримов Н., Полимбетова Н., & Искаков Б. Получение трансгенных растений картофеля для реализации метода “HIGS” в рамках борьбы с Phytophthora infestans // Ізденістер, нәтижелер — Исследования, результаты. – 2024. — №3 (103). – С. 151-158 https://journal.kaznaru.edu.kz/index.php/research/article/view/681
- 5 Тезекбаева Б., Хасейн А., Хансеитова А., Есенбаева Г., Георгиева М., Малахова Н. Оптимизация условий введения в культуру in vitro и микроклонального размножения растений ежевики (Rubus L.) // Izdenister Natigeler — Исследования, результаты. — 2024. — № 3(103), ‒ С. 278-288. https://doi.org/10.37884/3-2024/31
Монографии
- 1 Крылдаков Р.В., Искаков Б.К. Растительные супрессоры сайленсинга на примере М-ВК (PVM): монография. – Алматы: Изд-во Дарын, 2024. – 214 с. ISBN978-01-09-1283-0.
- 2 Александрова А.М., Карпова О.В. Трансген-индуцированная РНК-интерференция в растениях картофеля, направленная против карлавирусов: монография. – Алматы: Изд-во Дарын, 2024. – 233 с. ISBN
- 3 Аубакирова К.П., Галиакпаров Н.Н. Молекулярно-генетическая оценка перспективных сортов винограда: монография. – Алматы: Изд-во Дарын, 2024. – 192 с. ISBN 978-601-09-6664-2.
Патенты и заявки на патент
- 1 Низкородова А.С., Крылдаков Р.В., Полимбетова Н.С., Искаков Б.К. Набор из праймеров и флуоресцентной пробы TaqMan для определения референсного гена 25S RRNA универсального для высших растений методом ПЦР // Патент РК на полезную модель №9489, МПКC 12Q 1/6876 C12Q 1/689, номер заявки 2024/0707.2 от 30.05.2024; опубл. № 22 от 30.05.2025.
- 2 Станбекова Г. Э., Жигайлов А. В., Надирова Л.Т., Крылдаков Р.В., Искаков Б. К. Набор синтетических олигонуклеотидов для обнаружения вироида латентной мозаики персика методом ОТ-ПЦР. Патент РК на полезную модель №9347. Дата подачи заявки №2024/0572.2 от 25.04.2024.
- 3 Малахова Н.П., Ефремова Ю., Тезекбаева Б. Способ адаптации пробирочных (in vitro) растений ирги канадской (Amelanchier canadensis) к условиям ex vitro. Патент РК на полезную модель №9524. Дата подачи заявки №2024/0836.2 от 1.07.2024.
- 4 Галиакпаров Н.Н., Аубакирова К.П., Ерболова Л.С., Рахатқызы А., Бақытжанова Ж.Н. Заявка на выдачу патента №2024/0598.1 от 17.07.2024.
- 5 Галиакпаров Н.Н., Аубакирова К.П., Ерболова Л.С., Рахатқызы А., Бакытжанова Ж.Н. Заявка на выдачу патента №2024/0600.1 от 17.07.2024.
Тезисы конференций
Yefremova Y., Malakhova N., Khanseitova A. and Urazayeva M. Genetic diversity of viruses infecting strawberries in the southeast of Kazakhstan. Международная научная конференция по биологии и биотехнологии растений (ICPBB). – Алматы, 2024. ‒ С. 55.
Лабораторные регламенты
Лабораторный регламент выращивания оригинального семенного картофеля (Solanum tuberosum L.) в аэропонной установке. – Алматы, 2024. – 20 с.
Лабораторный регламент выращивания посадочного материала растений ирги (Amelanchier canadensis). – Алматы, 2024. – 13 с.