«МикроРНК как маркер дифференциальной диагностики рака легких и туберкулеза».
Актуальность. Туберкулез и рак легких являются одними из наиболее актуальных медико-социальных проблем во всем мире. Для обоих заболеваний своевременность постановки диагноза является ключевым фактором успешности лечения. Однако, при отрицательном бактериовыделении у пациента, из-за схожести клинико-рентгенологической картины двух заболеваний возникают трудности в дифференциальной диагностике, что может привести к задержке постановки правильного диагноза и вследствие этого к снижению эффективности терапевтических мероприятий из-за запущенности патологического процесса. Существующие инструментальные методы забора биопсийного материала из тканей легкого являются довольно травматичными процедурами и могут привести к серьезным осложнениям. Перечисленные трудности в дифференциальной диагностике туберкулеза и рака легких являются основанием для поиска новых надежных и малоинвазивных методик. Молекулы микроРНК являются чрезвычайно перспективными биомаркерами для диагностики и прогностики различных заболеваний. Изменение концентрации микроРНК может отражать патологический процесс, а то обстоятельство, что эти молекулы свободно циркулируют в биологических жидкостях (в крови, слюне, моче и т. д.), дает возможность для разработки простого и малоинвазивного метода диагностики. В данном проекте предлагается исследовать потенциал циркулирующей микроРНК как маркера ранней дифференциальной диагностики туберкулеза и рака легких в казахстанской популяции. В Казахстане такие исследования будут выполнены впервые.
Цель проекта: оценить применимость циркулирующей микроРНК в качестве биомаркера при дифференциальной диагностике рака легких и туберкулеза.
Методология. Исследование будет выполнено по типу «случай-контроль». Предполагается изучить дифференциальную экспрессию плазменных микроРНК в трех группах: пациенты с туберкулезом, пациенты с раком легких и здоровые контроли. Выявление потенциальных микроРНК-маркеров будет осуществлено в два этапа. На первом скрининговом этапе будет протестирован расширенный список кандидатных микроРНК на тестовой выборке. Затем, микроРНК, показавшие дифференциальную плазменную экспрессию между изучаемыми группами, будут проверены на полной выборке (валидационный этап). Количественный анализ транскриптов будет проведен с помощью количественной ПЦР, которая является проверенным методом для определения концентрации микроРНК в плазме крови и остается на сегодняшний день лучшим способом анализа небольшого числа микроРНК.
Ожидаемые результаты. В результате реализации проекта будет оценен потенциал использования плазменной микроРНК в ранней дифференциальной диагностике туберкулеза и рака легких в казахстанской популяции. Результаты проекта будут способствовать разработке нового достоверного и малоинвазивного метода диагностики рака легких и туберкулеза на основе циркулирующей микроРНК, который приведет к повышению эффективности лечения. Кроме того, с помощью такого микроРНК-маркера возможно будет прогнозировать эффективность терапии, прогнозировать осложнения заболеваний, различать подтипы заболеваний и др. Ожидаемый социально-экономический эффект достигается в случае разработки нового быстрого и малоинвазивного метода диагностики: в результате пациенты получат своевременную помощь, расходы на лечение снизятся, а в более долгосрочной перспективе это должно привести к уменьшению экономических потерь, связанных с утратой трудоспособности населения.
По результатам проекта будут опубликованы:
- не менее 2 (двух) статей и (или) обзоров в рецензируемых научных изданиях по научному направлению проекта, индексируемых в Science Citation Index Expanded базы Web of Science и (или) имеющих процентиль по CiteScore в базе Scopus не менее 35 (тридцати пяти);
- не менее 1 (одной) статьи или обзора в рецензируемом зарубежном или отечественном издании, рекомендованном КОКСОН;
- либо не менее 1 (одной) статьи или обзора в рецензируемом научном издании, входящем в 1 (первый) квартиль по импакт-фактору в базе Web of Science.
Исполнители:
№ п/п |
Ф.И.О., образование, степень, ученое звание |
Индекс Хирша, идентификаторы ResearcherID, ORCID, Scopus Author ID (при наличии) |
Роль в проекте или программе, |
1 |
Утегенова Гулжахан Абдужали-ловна, КазНУ, PhD |
H-index: 4. ORCID ID: Researcher ID: Scopus ID: 57195075321. |
Руководитель проекта, снс; общее руководство, постановка задач, концепция и дизайн экспериментов, обработка и интерпретация экспериментальных данных, отчетность и публикации |
2 |
Аширбеков Ельдар Ерланович, СКГУ, КазНУ, магистр биологии |
H-index: 2. ORCID ID: Researcher ID: Scopus ID: 39960967900. |
Ответственный исполнитель, и. о. зав. лаб.; концепция и дизайн экспериментов, обеспечение материалами, статистическая обработка и интерпретация экспериментальных данных, отчетность и публикации |
3 |
Абайлдаев Арман Оразалыұлы, КазНУ, магистр биологии |
H-index: 2. ORCID ID: Researcher ID: Scopus ID: |
Исполнитель, нс; оптимизация методики и постановка экспериментов, отвечает за точность и достоверность получаемых данных, бесперебойную работу приборов, поверку и калибровку измерительных приборов, сбор биоматериала |
4 |
Алжанұлы Бахытжан, КазНУ, магистр биологии |
H-index: 0. Researcher ID: Scopus ID: |
Исполнитель, нс; сбор биоматериала, пробоподготовка, постановка экспериментов, литературный обзор, подготовка публикаций |
5 |
Хамитова Назгүл Хамитқызы, КазНУ, магистр биологии |
— |
Исполнитель, мнс; сбор биоматериала, пробоподготовка, постановка экспериментов, литературный обзор, подготовка публикаций |
6 |
Саткен Қантемір Серікболұлы, КазНУ |
— |
Исполнитель, лаборант; сбор биоматериала, пробоподготовка, постановка экспериментов, техническое обеспечение, подготовка публикаций |
В результате реализации проекта были получены следующие основные результаты:
- Сформирована коллекция образцов плазмы от 82 первичных больных с раком лёгкого, 41 больного лёгочным туберкулёзом с трудностями в дифференциальной диагностике, и 41 здорового контроля.
- Проведен скрининг микроРНК путем профилирования 188 кандидатных микроРНК на пяти пулированных образцах исследуемых групп: 10 пациентов с аденокарциномой лёгкого, 10 пациентов с плоскоклеточной карциномой лёгкого, 9 пациентов с мелкоклеточной карциномой лёгкого, 10 пациентов с туберкулёзом лёгкого и 10 здоровых контролей. В результате многоэтапного отбора по качеству амплификации, представленности тракрипта, кратности различий в уровнях и критериям приминимости потенциального маркера, мы отобрали 14 микроРНК для дальнейших исследований.
- Проведена валидация отобранных потенциальных микроРНК-маркеров на расширенной выборке отдельных образцов от 68 пациентов с раком лёгкого, 38 пациентов туберкулёзом и 41 здорового контроля. По результатам вавлидации выявлено достоверное повышение уровней 12 микроРНК у больных раком лёгкого по сравнению с здоровыми контролями, достоверное повышение уровней 13 микроРНК у больных раком лёгкого по сравнению с больными туберкулёзом, достоверное повышение 1 микроРНК и достоверное понижение 1 микроРНК у пациентов с туберкулёзом по сравнению с здоровыми контролями. Кроме того, выявлены достоверные изменения уровней микроРНК в зависимости от клинико-патологических характеристик.
- Регрессионный анализ и анализ частичной корреляции показали, что, несмотря на несоответствие по возрасту пациентов с туберкулёзом группам больных раком лёгкого и контролей, возраст не оказывает существенного влияния на наблюдаемые различия в уровнях микроРНК.
- Оценена диагностическая и прогностическая ценность микроРНК-маркеров при раке лёгкого и туберкулёзе. Проведенный анализ показал, что три микроРНК имеют высокий потенциал в дискриминации пациентов с раком лёгкого и здоровых лиц; три микроРНК имеют высокий потенциал в дискриминации пациентов с раком лёгкого и пациентов с туберкулёзом, одна микроРНК имеет высокий потенциал в дискриминации пациентов с мелкоклеточной карциномой легкого и пациентов с немелкоклеточной карциномой лёгкого, две микроРНК имеют высокий потенциал в дискриминации пациентов с раком лёгкого на I стадии от здоровых лиц и пациентов с туберкулёзом.
- Анализ литературы показал, что предыдущие исследования согласуются с полученными нами данными, свидетельствуя о важной роли выявленных микроРНК в патогенезе рака лёгкого. Недостаток исследований, посвященных применению микроРНК в дифференциальной диагностике рака лёгкого и туберкулёза, подчеркивают важность полученных нами результатов для развития дифференциальной диагностики лёгочных заболеваний.
- Несмотря на имеющиеся в литературе данные об дисрегуляции микроРНК при туберкулёзе, мы не выявили специфичных микроРНК-маркеров, которые могли бы облегчить диагностику туберкулёза.
Резюмируя проведенное исследование, можно утверждать, что циркулирующая в плазме крови микроРНК имеет высокий потенциал в диагностике (в том числе ранней диагностике) рака лёгкого, высокий потенциал в дифференциальной диагностике рака лёгкого (в том числе раннего) и туберкулёза, и низкий потенциал в диагностике туберкулёза.
Основные конструктивные и технико-экономические показатели: плазменные микроРНК-биомаркеры для ранней и дифференциальной диагностики рака лёгкого и туберкулёза по уровню относительно оптимальной точки отсечения.
Эффективность: AUC > 0,8, что соответствует хорошей дискриминационной способности классификатора; чувтствительность > 0,8, специфичность > 0,8.
Область применения: медицина, диагностика рака лёгкого, дифференциальная диагностика рака лёгкого и туберкулёза.
Дальнейшие перспективы. Для подтверждения клинической применимости наших результатов необходимы дальнейшие исследования. Будущие исследования должны расширить размер выборки, увеличить диапазон анализируемых лёгочных заболеваний и, при необходимости, рассмотреть дополнительные переменные, которые могут искажать результаты. Кроме того, продольные исследования могли бы расширить прогностическую значимость этих биомаркеров для отслеживания прогрессирования заболевания, реакции на лечение и прогноза, что в свою очередь внесет вклад в разработку персонализированных стратегий лечения.
По материалам работ опубликована одна статья, две статьи находятся на рецензии:
- Ashirbekov Y, Khamitova N, Satken K, Abaildayev A, Pinskiy I, Yeleussizov A, Yegenova L, Kairanbayeva A, Kadirshe D, Utegenova G, et al. Circulating MicroRNAs as Biomarkers for the Early Diagnosis of Lung Cancer and Its Differentiation from Tuberculosis. Diagnostics. 2024; 14(23):2684. https://doi.org/10.3390/diagnostics14232684 (IF 3.0; JCR Q1; CiteScore percentile 62).
- Magazova A., Ashirbekov Y., Abaildayev A., Satken , Utegenova G., Belkozhayev A., Balmukhanova A., Dzhumatayeva Z., Beissova A., Shargorodska I., Balmukhanova A., Sharipov K. Circulating microRNAs as potential biomarkers for diabetic retinopathy in the population of Kazakhstan // Peerj. – 2024. (IF 2.3, JCR Q2, CiteScore percentile 78) (в печати).
- Аширбеков Е.Е., Пинский И.В., Хамитова Н.Х., Саткен Қ.С., Елеусизов А.М., Егенова Л.П., Кайранбаева А.М., Магазова А.Р., Утегенова Г.А. МикроРНК как биомаркер дифференциальной диагностики туберкулёза и рака лёгкого // Вестник КазНМУ. – 2024. (журнал рекомендован КОКСНВО) (в печати).